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　　1.實(shí)驗(yàn)材料

　　1.1培養(yǎng)基：如做大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)可選用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂或麥康凱培養(yǎng)基，做沙門氏菌可選擇血液瓊脂。

　　1.2藥敏試紙：購(gòu)買、自制或廠家提供

　　1.3細(xì)菌：從病雞病變部位提取，如肝臟、心臟脾臟等臟器。

　　1.4接種環(huán)，酒精燈，打孔器，牛津杯。

　　1.5移液器，滴頭。

　　2實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

　　2.1藥敏片的準(zhǔn)備：自制。

　　2.1.1藥敏片的制備：取定性濾紙，用打孔機(jī)打成6毫米直徑的圓形小紙片，取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎，經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥。

　　2.2.2抗菌藥紙片制作：在上述含有50片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入藥液適量，并翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過(guò)夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個(gè)月。

　　2.2藥液的制備(用于商品藥的試驗(yàn))：按商品藥治療量10-20倍比例配置藥液如治療量為1L水加1g加200-300ml水或1L加3-5g藥，及配置藥敏片所用的藥液。

　　3.試驗(yàn)操作方法：

　　3.1藥敏片法

　　3.1.1在“超凈臺(tái)”(或自制無(wú)菌操作臺(tái))中，用(酒精燈)經(jīng)火焰滅菌的接種環(huán)從病料中挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式：用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2，然后找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另：可將待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液，將少量混懸液倒入平皿培養(yǎng)基上，輕晃平皿使鋪勻，放置5-10min)。

　　3.1.2將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上，一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片(外周一般可貼4-5片)，每種藥敏片的名稱要記住。

　　3.13將平皿培養(yǎng)基倒置放于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察效果。$#XF#$

　　4.結(jié)果觀察：

　　在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制。過(guò)夜培養(yǎng)后形成一個(gè)抑菌圈，抑菌圈越大，說(shuō)明該菌對(duì)此藥敏感性越大，反之越小，若無(wú)抑菌圈，則說(shuō)明該菌對(duì)此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細(xì)菌濃度有直接關(guān)系。

　　5.判定標(biāo)準(zhǔn)：

　　5.1藥敏實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標(biāo)準(zhǔn)。

　　5.2 藥物敏感實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)參考表1，抑菌圈直徑15毫米以上為高敏，10毫米以下為低敏，無(wú)抑菌圈為不敏。

　　6.影響藥敏結(jié)果的因素：

　　6.1培養(yǎng)基：應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時(shí)，厚度合適(約5-6mm)，不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基18-20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對(duì)氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

　　6.2細(xì)菌接種量：細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。

　　6.3藥物濃度：藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，需精確配制。

　　6.4培養(yǎng)時(shí)間：一般培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37℃、12-24小時(shí)，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4℃冰箱內(nèi)2-4小時(shí)，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37℃溫箱中培養(yǎng)，可以推遲細(xì)菌的生長(zhǎng)，而得到較大的抑菌圈。

　　7.應(yīng)用

　　藥物敏感實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)選擇高敏藥物進(jìn)行治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時(shí)應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，因?yàn)槲覀兯幟魧?shí)驗(yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸，而在給禽用藥的時(shí)候，必須通過(guò)機(jī)體的吸收才能使藥物達(dá)到一定的效果，所以在給禽用藥時(shí)，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會(huì)達(dá)到好的治療效果。